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肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法

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  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2025-10-18
  • 訪  問  量:787

詳細介紹

特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產品名稱:肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法

產品規格:50管/48樣

檢測方法:紫外分光光度法

產品貨號:BK-01S6956

產品分類:其它系列
商品介紹:

測定意義:

C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌類中,該酶催化肉桂酸羥化作用產生4-香豆酸鹽,是苯丙烷途徑中繼L-苯丙解氨酶之后的第二個關鍵酶。

測定原理:

C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映C4H活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

 

細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

吖啶黃素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5

100mg 5- 溴 -4- 氯 -3-  -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存

500支 1.5 mL RNase-free 離心管  常溫

250 T 過氧化氫定量分析試劑盒(水兼容性) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

50mL Manganese Chloride Solution(溶液),1M  Manganese Chloride Solution,1M  常溫保存

0.5mL NTP溶液,10 mM NTP Solution,10 mM -20℃保存

2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低溫運輸,-20℃保存

氣單胞菌添加劑  5支

1瓶 PC-12(未分化)細胞株 PC-12(未分化) 低溫運輸和保存

疊氮鈉葡萄糖肉湯 Azide Dextrose Broth 250g

25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室溫干燥保存

肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法COMMD10  銅代謝結構域蛋白10抗體 規格: 0.2ml

Complement C3b alpha' chain  補體C3b-α鏈抗體 規格: 0.1ml

CYP17  細胞色素P450 17抗體 規格: 0.1ml

Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus)  基爾曼氏細小毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在毒KRV)C端 1ml

Mouse Anti-Goat IgG/Bio  標記的小鼠抗羊IgG 規格: 0.1ml

Ran/ARA24  雄激素受體相關蛋白24抗體 規格: 0.2ml

CHFR  泛素連接蛋白CHFR抗體 規格: 0.2ml

Goat Anti-human IgG/AP  堿性磷酸(AP)標記的羊抗人IgG 規格: 0.1ml

FOXF1  叉蛋白F1抗體 規格: 0.2ml

CHORDC1  含半胱和組豐富域蛋白1抗體 規格: 0.2ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP  堿性磷酸(AP)標記的兔抗小鼠k鏈 規格: 0.1ml

VEGF-C  管內皮生因子C型抗體 規格: 0.1ml 

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

 


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