
ELISA(酶聯免疫吸附實驗)試劑盒是一種用于測量蛋白質、抗體或其他分子濃度的常用檢測工具。它通常由塑料微孔板和預涂有特定抗體或蛋白質的試劑盒組成,可以方便、快速、準確地檢測樣品中目標物質的存在以及其濃度大小。
ELISA試劑盒代測實驗步驟如下:
1. 實驗準備
試劑:預包被酶標板、標準品、化檢測抗體、SABC工作液、顯色液、終止液等?
儀器:酶標儀、自動洗板機、恒溫箱、移液器等?
樣本:血清/血漿/細胞培養上清等,需按標準方法處理
2. 標準品稀釋
準備6個離心管,標記S2-S7和blank?
各管加入200μl標準品稀釋液,按梯度稀釋標準品?
稀釋后濃度梯度:640pg/ml、320pg/ml、160pg/ml、80pg/ml、40pg/ml、0pg/ml
3. 加樣與孵育
酶標板孔加入50μl標準品/待測樣本
37℃孵育50分鐘?
洗板3次,每次浸泡1-2分鐘?
4. 檢測抗體反應
每孔加入100μl化檢測抗體工作液?
37℃孵育50分鐘?
洗板3次?
5. 顯色與測定
每孔加入100μl SABC工作液,37℃孵育30分鐘?
加入TMB顯色液,避光反應10-20分鐘
加入終止液,15分鐘內測定450nm吸光度。
操作步驟:

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